CRISPR 기반 돌연변이 클로닝을 위한 GUIDE-seq 및 CIRCLE-seq의 비교 분석과 게놈 삽입 전략

GUIDE-seq와 CIRCLE-seq는 CRISPR 유전자 편집의 비표적 효과(off-target effects)를 확인하고, 원하는 게놈 위치에 정확히 유전자를 삽입하기 위한 첨단 방법론이다.

비표적 돌연변이 탐지 원리

• GUIDE-seq: Cas 효소와 가이드 RNA가 결합하여 발생하는 절단 부위를 이용하여 게놈 전체에서 예상치 못한 절단 지점(indels)을 찾아낸다. 이는 주로 직접적인 염기쌍 불일치(mismatch) 위치를 확인한다.
• CIRCLE-seq: Circular DNA 프라이밍 전략을 사용하여 다양한 절단 사건을 증폭시키며, 더 넓은 범위의 잠재적 절단 부위를 검출할 수 있다.

두 기술은 높은 정확성을 제공하지만, 탐지 민감도와 라이브러리 준비 과정에서 차이를 보이므로, 목표 유전자의 종류 및 필요한 검증 수준에 따라 적절한 방법을 선택하여 게놈 삽입 전략을 수립해야 한다. 이는 유전자 가위 기술의 안전성 확보에 필수적이다.